Родилась 9 апреля 1986 года. Родители Мистер, Конни и Дуг входили в группу которая занималась контрабандой марихуаны из Ямайки в США. Они оба были арестованы за участие в контрабандной деятельности. До начала суда они были освобождены под залог, в это время мать Лейтон забеременела. Позже она была осуждены на десять лет в тюрьме штата Техас, где она провела бо́льшую часть беременности.

Лейтон родилась в больнице Техаса, куда её мать была доставлена во время схваток. Через три месяца после родов мать вернулась в тюрьму, чтобы продолжить отбывать свой срок. Пробыв в тюрьме шестнадцать месяцев, она была досрочно освобождена и стала жить вместе с дочерью. Когда Лейтон было 11, она переехала со своей тетей в Нью-Йорк, и начала работать в качестве модели в "Wilhelmina", затем она работала с фотографом Софией Коппола.

Дебют Мистер на телевидение произошёл в 1999 году когда она сыграла Алиссу Тернер в сериале «Закон и Порядок». После этого были эпизодические роли в сериалах «Седьмое небо», «C.S.I.: Место преступления Майами», «24 часа», «8 простых правил для друга моей дочери-подростка» и других. В большом кино дебют Лейтон Мистер состоялся в 2003 году в фильме «Проклятие самоубийцы».

С 2007 года Лейтон участвует в популярном сериале «Сплетница», где играет роль Блэр Уолдорф. Сериал рассказывает о жизни студентов с Верхнего Ист-Сайда.

Лейтон живет в Нью-Йорке, в районе Вест Вилледж. У нее роман с молодым актером Себастианом Стэном, который снимался вместе с ней в сериале «Сплетница». В интервью журналу Teen Vogue Мистер рассказала о своем прошлом: «Я родилась не в тюрьме, я родилась в больнице. Я жила со своей матерью в течение нескольких месяцев, после чего я жила со своей бабушкой, пока моя мама не вышла. Но у меня была нормальная жизнь.».

Мистер заняла 12 место в списке "2009 Hot 100" журнала Maxim.

В 2010 году Лейтон снялась в фильмах трех картинах «Безумное свидание», «На расстоянии любви» и «Я ухожу – не плачь».

В том же 2010 году Лейтон заняла 10-ю строчку в списке «Самых Сексуальных» по версии журнала FHM.

Лейтон записала свой дебютный альбом в стиле электро-поп, который вышел в начале 2011 года.

Также в 2011 году Лейтон сыграла главные роли в фильмах «Соседка по комнате» и «Монте-Карло», где ее партнерами по площадке были Минка Келли, Селена Гомес и Энди МакДауэлл.

В 2012 году Лейтон снялась в главной роли в фильме «Любовный переплет» с Хью Лори, а также в фильме «Папа-досвидос» с Адамом Сэндлером.