Джесси Гордон Спенсер родился 12 февраля 1979 года в Мельбурне, Австралия. Окончил Кентерберийскую Начальную школу, Среднюю школу Мэльверна и Скотч Колледж. С десяти лет Спенсер играл на скрипке, также он играет на гитаре и пианино.

В Австралии и Великобритании Спенсер стал широко известен после роли Билли Кеннеди в австралийской мыльной опере «Соседи», в которой он играл шесть лет (с 1994 по 2000 года). После этого он снялся в фильмах «Против течения», «Городские Девчонки» и «Death in Holy Order».

С 2001 по 2003 год Джесси снимался в австралийском сериале «Всегда зеленее».

В том же 2003 году с его участием вышло две картины - «Против течения» и «Городские девчонки».

В 2004 году Спенсер получил роль в сериале «Доктор Хаус» (2004-2012), главную роль в котором исполнил Хью Лори.

В 2006 году Джесси Спенсер снялся в фильме «Расцвет» вместе с партнершей по сериалу «Доктор Хаус» Дженнифер Моррисон.

11 мая 2006 года за свою работу в телесериале «Доктор Хаус» он получил «Золотой Бумеранг» от ассоциации «Австралийцы в кино».

В 2007 году журнал «People Magazine» включил его в выпуск «100 самых красивых людей».

В 2012 году Джесси начал сниматься в сериале «Пожарные Чикаго» (2012-...).